Abstract Purpose: To characterize qualitatively and quantitatively the absorption of metronidazole solution, in greater concentrations and for longer periods, when applied topically to an experimental open skin wound model. Methods: An open skin wound, 2 cm in diameter and total skin thickness was prepared, under anesthetic, in the dorsal region of 108 Wistar rats weighing between 300 and 350 grams. The animals were allocated to groups of 18 animals in accordance with the concentration of metronidazole in the solution to be applied daily to the wound. In the control group (CG), 0.9% sodium chloride solution was used for application, and in the experimental groups (GI, GII, GIII, GIV and GV) metronidazole solution at 4%, 6%, 8%, 10% and 12%, respectively, was applied. After 3, 7 and 14 days of treatment. Blood samples collected through cardiac puncture were examined for the existence or non-existence of metronidazole, using high performance liquid chromatography (HPLC). Detected metronidazole values were compared statistically within each group (temporal analysis 3 days X 7 days X 14 days) and between the groups that used topical metronidazole (4% X 6% X 8% X 10% and 12%) using the Kruskal-Wallis test, considering a statistical significance of 95% (p<0.05). Results: Metronidazole was detected in all the samples at all times in all the groups in which topical metronidazole was applied to the wounds. Characteristically, there was no significant difference between the doses obtained within each group over time (3 days X 7 days X 14 days) GI=0.461; GII=0.154; GIII=0.888; GIV= 0.264 and GV=0.152. In the evaluation between groups, a similar degree of absorption was found after 3 days (p=0.829) and 14 days (p=0.751). Conclusion: The serum concentration of metronidazole that was achieved was not influenced by the concentration of the solution applied to the skin wound, with similar extend, or by the duration of the application.

RESUMO Objetivo: avaliar os efeitos da administração tópica do metronidazol na diferenciação de fibroblastos e na contração da ferida durante cicatrização experimental por segunda intenção em ratos. Métodos: cento e oito animais foram submetidos a uma ferida circular no dorso, com 2cm de diâmetro e divididos em seis grupos: grupo controle, com aplicação de solução salina sobre a ferida e cinco grupos experimentais divididos de acordo com a concentração da solução do metronidazol utilizada (4%, 6%, 8%,10% e 12%). Curativos foram realizados diariamente durante todo o período do experimento, que foi subdividido em três momentos de análise: três, sete e 14 dias. A contração da ferida foi avaliada por planimetria digital e os miofibroblastos e protomiofibroblastos foram identificados usando técnicas de imuno-histoquímica CD34 e a-SMA. Resultados: a contração da ferida não apresentou diferença entre os grupos e o controle. Os protomiofibroblastos foram significativamente mais numerosos aos sete dias (p=0,022) nos grupos metronidazol de 4%, 6% e 8%. Após 14 dias, nos mesmos grupos, os miofibroblastos predominaram significativamente (p=0,01). Conclusão: a administração tópica de solução de metronidazol em feridas de pele com cicatrização por segunda intenção foi capaz de melhorar a diferenciação de fibroblastos. A fase de contração da cicatrização de feridas permaneceu inalterada, sem redução significativa da contração avaliada pela planimetria digital. Estes resultados podem ser utilizados em favor do processo de cicatrização de feridas.

ABSTRACT Objective: to assess the effects of topical administration of metronidazole on fibroblast differentiation and on wound contraction during experimental secondary intention wound healing in rats. Methods: we submitted 108 rats to a circular wound on the back, 2cm in diameter, and divided them into six groups: control group, with application of saline solution on the wound and five experimental groups, divided according to the concentration of metronidazole solution used (4%, 6%, 8%, 10% and 12%). We changed the dressings daily throughout the trial period, which comprised three stages of analysis: three, seven and 14 days. We evaluated wound contraction by digital planimetry, and identified myofibroblasts and protomyofibroblasts using CD34 and α-SMA immunohistochemistry techniques. Results: wound contraction was not different between the experimental and the control groups. Protomyofibroblasts were significantly more numerous at seven days (p=0.022) in the 4%, 6% and 8% metronidazole groups. After 14 days, in the same groups, myofibroblasts predominated significantly (p=0.01). Conclusion: the topical administration of metronidazole solution in skin wounds healing by secondary intention was able to improve the differentiation of fibroblasts. The contraction phase of wound healing remained unchanged, without significant reduction of the contraction evaluated by digital planimetry. These results can be used in favor of the wound healing process.

Resumo Contexto O subgalato de bismuto é um metal pesado e insolúvel, utilizado por suas propriedades adstringentes e hemostáticas. Objetivo Avaliar os efeitos do subgalato de bismuto na cicatrização mediante observação de miofibroblastos em pele de ratos. Métodos Foram utilizados 60 ratos da linhagem Wistar, que receberam uma ferida no dorso da pele. Os animais foram divididos em dois grupos: controle (aplicação diária de cloreto de sódio a 0,9%) e experimental (aplicação diária de 0,5 mg de subgalato de bismuto). Cada grupo foi subdividido em três subgrupos, que foram reoperados para retirada da ferida em 3, 7 e 14 dias. Foi realizada coloração de hematoxilina eosina, picrosirius e imuno-histoquímica para avaliar contagem de miofibroblastos, resposta inflamatória e síntese de colágeno. Resultados Não foi encontrada diferença entre os grupos controle e experimento com relação ao processo inflamatório – subgrupos 3 dias (p = 1), 7 dias (p = 0,474) e 14 dias (p = 303). A avaliação dos colágenos tipo I e III no grupo-controle não demonstrou benefícios de cicatrização – 3 dias (p = 0,436), 7 dias (p = 0,853) e 14 dias (p = 0,436); já no grupo experimental, houve aumento dos colágenos tipos I e III nos subgrupos 3 e 14 dias (p = 0,005). A imuno-histoquímica confirmou os resultados encontrados na coloração hematoxilina eosina, na qual a área de miofibroblastos entre os subgrupos, nos grupos experimental (p = 0,4) e controle (p = 0,336), foi indiferente. Conclusão A utilização do subgalato de bismuto em ferida de pele de ratos não evidenciou benefícios na cicatrização, ou seja, não houve diferença na fibroplasia quando comparados os grupos experimental e controle.

Abstract Background Bismuth subgallate is an insoluble heavy metal that is used for its astringent and hemostatic properties. Objective To evaluate the effects of bismuth subgallate on the healing process by observation of myofibroblasts in the skin of rats. Methods A sample of 60 Wistar rats was used. Each rat was subjected to a dorsal skin wound and allocated to one of two groups: a control group, in which 0.9% sodium chloride was administered daily, or an experimental group, in which 0.5 mg of bismuth subgallate was administered daily. Each of these groups was further subdivided into three subsets, which were reoperated after 3, 7 and 14 days respectively for excision and collection of the skin wound specimens. Samples were treated with hematoxylin eosin, picrosirius, and immunohistochemical staining to enable assessment of myofibroblast counts, inflammatory response phase, and collagen synthesis. Results No inflammatory process differences were detected between the control and experimental groups at 3 days (p = 1), 7 days (p = 0.474), or 14 days (p = 303). Evaluation of types I and III collagen in the control group did not demonstrate healing benefits at 3 days (p = 0.436), 7 days (p = 0.853), or 14 days (p = 0.436); whereas in the experimental group there were increases in types I and III collagen at 3 and 14 days (p = 0.005). Immunohistochemical analysis confirmed the results of hematoxylin eosin staining, since there were no differences between subsets in terms of area of myofibroblasts, in the experimental (p = 0.4) or the control (p = 0.336) groups. Conclusions Administration of bismuth subgallate to skin wounds in rats did not result in any evidence of benefits to healing, i.e., no difference in fibroplasia was detected when experimental and control groups were compared.

OBJETIVO: Avaliar a ação do metronidazol em solução a 4%, tópico, em feridas com cicatrização por segunda intenção em ratos. MÉTODOS: Fez-se feridas circulares com dois centímetros de diâmetro no dorso de ratos e estudou-se a cicatrização em 3, 7, 14 e 21 dias. A contração da ferida e a epitelização periférica foram avaliadas por planimetria digital e os miofibroblastos pela imunoistoquímica com a-SMA. RESULTADOS: Não houve diferença entre os grupos em relação à contração ferida. Nas feridas tratadas com metronidazol a epitelização periférica precoce foi evidente no 3°dia (p<0,001) e não houve diferenças nos demais períodos. No grupo controle, o número de miofibroblastos foi maior no 7° dia (p=0,003) e no 14° dia (p=0,001), e no grupo experimento, foi sugestivamente maior no 3° dia (p=0,06). CONCLUSÃO: O metronidazol, solução a 4%, na dose de 50mg/kg/dia, aplicado de forma tópica nas feridas com cicatrização por segunda intenção, facilita a epitelização periférica precoce, não interfere na contração da ferida e atrasa o aparecimento dos miofibroblastos.

OBJECTIVE: To assess the efficacy of topical a 4% metronidazole solution in wounds healing by secondary intention in rats. METHODS: We made circular wounds two inches in diameter at the back of rats and studied healing at 3, 7, 14 and 21 days. The wound contraction and epithelialization were assessed by peripheral digital planimetry and myofibroblasts by immunohistochemistry with a-SMA. RESULTS: There was no difference between groups regarding wound contraction. In wounds treated with metronidazole peripheral epithelialization was evident early on day 3 (p <0.001) and there were no differences in other periods. In the control group, the number of myofibroblasts was higher on day 7 (p = 0.003) and day 14 (p = 0.001) and in the experimental group it was suggestively higher on day 3 (p = 0.06). CONCLUSION: Metronidazole 4% solution at a dose of 50 mg/kg applied topically to wounds healing by secondary intention facilitates early peripheral epithelialization, does not interfere with wound contraction and delays the appearance of myofibroblasts.

CONTEXTO: Cerca de 2,7% da população brasileira tem úlceras crônicas nos pés e nas pernas, porcentagem que chega a 10% nos diabéticos e que representa a segunda causa de afastamento do trabalho no Brasil. Isso demonstra a necessidade de se encontrar um produto de baixo custo que favoreça a cicatrização dessas feridas. OBJETIVO: Avaliar os efeitos do metronidazol na cicatrização de feridas por segunda intenção. MÉTODOS: Utilizaram-se 80 ratos machos, em cujos dorsos se produziu uma ferida, distribuindo-se, os animais, em dois grupos de 40. Os ratos do grupo-controle tiveram suas feridas tratadas com solução de NaCl 0,9%, e os pertencentes ao grupo-experimento, com metronidazol 4%. No terceiro, sétimo, 14º e 21º dias, avaliou-se o processo cicatricial por parâmetros macroscópicos, histológicos e imunoistoquímicos. RESULTADOS: A concentração de colágeno foi maior nas cicatrizes dos animais do grupo-experimento em todos os tempos examinados. A concentração de colágeno do tipo I também foi significante no sétimo dia (p = 0,020) e no 21º dia (p = 0,016). O colágeno tipo III mostrou concentração semelhante nos tempos iniciais e apresentou-se com maior concentração no 21º dia (p = 0,005). A angiogênese, avaliada pelo anti-CD34, demonstrou maior número de vasos, no grupo-experimento, com diferença significante no terceiro dia (p < 0,001) e no 14º dia (p = 0,003). CONCLUSÃO: O metronidazol contribui para a cicatrização de feridas por segunda intenção, estimulando a produção de colágeno e a angiogênese.

CONTEXT: Chronic feet and leg ulcers affect about 2.7% of the Brazilian population, 10% of diabetic patients. The condition represents the second most frequent cause of absence from work in Brazil. This shows the need for a product that promotes healing of these wounds at a low cost. OBJECTIVE: To evaluate the effects of metronidazole on ulcer healing by second intention. METHODS: Eighty male rats divided into two groups of 40 had a wound made on their dorsum. The control group was treated with a 0.9% NaCl solution and the experimental group was treated with 4% metronidazole. On the third, seventh, 14th and 21st days, the healing process was assessed through macroscopical, histological and immunohistochemical parameters. RESULTS: Collagen concentration was higher in wounds in the experimental group in all samples. Concentration of type I collagen was also significant on the 7th (p = 0.020) and 21st (p = 0.016) days. Concentration of type III collagen was similar in both groups in the initial phase, but it was higher in the experimental group on the 21st day (p = 0.005). Angiogenesis, assessed with anti-CD34, revealed a larger number of vessels in the experimental group, with a significant difference on the third (p < 0.001) and 14th (p = 0.003) days. CONCLUSION: Metronidazole contributes to healing wounds by second intention and stimulates collagen production and angiogenesis.